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高通量微升級液滴培養組學系統的核心操作

更新時間:2025-07-31      點擊次數:411
高通量微升級液滴培養組學系統是基于液演微流控技術開發的微型化高通量單細胞培養及分選裝備,可以實現對環境菌群在單細胞水平上進行分離培養,并分選保存至多孔板中,形成雙重備份。單次運行實現可以處理約5000個液滴(500個單克隆),液滴生成后存儲于高透氣性管路中進行孵育(0-3天),最后通過光學信號(OD、熒光、化學發光等)進行檢測分選,分選后的液滴進入多孔板中并且可以形成雙重備份。
核心操作流程:
步驟1:液滴生成
將樣品與培養液分別注入芯片進樣口,啟動液滴生成模塊;
控制液滴體積為1-4μL‌,通量5000-10000個/小時‌,顯微鏡初步確認單細胞包裹率‌。
步驟2:液滴培養
液滴轉移至高透氣性聚合物管路(如氟化乙烯丙烯共聚物管路);
設置培養參數:
溫度:根據微生物需求(通常25-37℃);
時間:‌0-60天‌(常規培養3-8天)‌;
氧分壓:需厭氧環境時啟用控氧模塊(維持氧氣≤0.04%)‌。
步驟3:實時光學檢測
開啟多波段光學檢測(OD600/熒光/化學發光),以‌1800-2500個/小時‌速率掃描液滴;
設定閾值:如OD>0.2判定為生長陽性液滴‌。
步驟4:目標液滴分選
激活分選模塊,將目標液滴(如高熒光信號)精準噴射至96/384孔板;
分選通量‌1800-2500個/小時‌,自動記錄位置并生成雙重備份‌。
步驟5:液滴回收與驗證
分選后孔板移出,穿刺液滴釋放細胞;
涂布平板或PCR驗證單克隆純度‌。
 
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